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探索、揭秘基因检测过程:21个步骤析出DNA
时间:2015-09-21 | 浏览量:2802
血样采集完后,就开始提取里边的DNA了。当天实验室正好有做细胞移植进行配型的,需要从血液中提取DNA,记者便走进实验室看看如何提取。提取DNA的每一步都需要人工操作,一共有21步,需要两三个小时的时间,先后需要加入五种试剂。
由于DNA是藏在白细胞的细胞核里,所以要先除去红细胞,然后让白细胞的细胞核裂解开,把藏在里边的DNA释放出来。“做这一步的时候把样本放在震荡仪上,震荡仪边晃动边加热,快速DNA释放。”冯智慧称,DNA被释放出来之后,还要除去样本中的蛋白,这又需要把样本放到0℃~5℃的冰箱中冷藏。
在实验室可以看到,样本被冷藏 10分钟之后,工作人员将其拿了出来,然后放在了离心机里边。“我们要对它进行离心5分钟,这样蛋白红细胞就会跟DNA 彻底分离开。”经过10分钟的离心后,工作人员取出了样本,记者看到离心管里的液体被分成了两个层面,下边的一层看上去有些暗红。“这个暗红色的就是需要分离出去的部分。”工作人员解释说。
“DNA就在这部分清澈透明的液体中,下一步就是把它提取出来。”工作人员将冷藏的乙醇倒入透明液体后,然后将管子进行颠倒晃动,不久里边就出现了白色棉絮状的东西。“这白色棉絮状东西就是DNA。”工作人员称,这还没有结束,还需要继续进行离心,将这些白色棉絮状的物体析出。过了5分钟,工作人员将其从离心机取出。这时,记者看到在离心管的底端有一个绿豆粒大小的白点。“这个白点就是我们要的东西。”
变换温度让DNA繁殖
“析出来的这部分DNA太少了,如果做实验肯定是不够用的,所以我们还得进行扩增。
工作人员将测量好浓度的DNA 可扩增剂加在一起,放进专用的仪器上。“这个步骤需要三个钟头。”工作人员称,在这个过程中温度是需要不断改变的,需要好几种温度交换进行。据介绍,DNA是两条链,扩增就得把链打开,然后每条链和所需要的材料结合。“链打开时需要一种温度,结合时需要另一种温度,所以在这个过程中温度是需要不断变化的。
让DNA“跑位”采集数据
“DNA 扩增后,就开始进行位点比对了。这个过程需要将DNA放入到一个完全封闭的仪器中,把它固定在一个位置,然后用电脑来操作机器。“这个过程中,DNA 会按照电脑发出的指令,从这头跑到那头。这样DNA上的所有信号都会被机器收集下来。
据介绍,在一般情况下,设备会自动提取15个位点,后再根据位点的型别套入公式进行计算,判断是否是亲子关系。
“试剂不同,位点相同的数量也不一样,拿我们用的试剂来说,如果有三个以上位点不同,就直接排除亲子关系了。如果不同的位点在三个以内,不能排除突变造成的不同,这种情况下还需要加做位点再次对比。整个亲子鉴定过程需要5到10个工作日。
由于DNA是藏在白细胞的细胞核里,所以要先除去红细胞,然后让白细胞的细胞核裂解开,把藏在里边的DNA释放出来。“做这一步的时候把样本放在震荡仪上,震荡仪边晃动边加热,快速DNA释放。”冯智慧称,DNA被释放出来之后,还要除去样本中的蛋白,这又需要把样本放到0℃~5℃的冰箱中冷藏。
在实验室可以看到,样本被冷藏 10分钟之后,工作人员将其拿了出来,然后放在了离心机里边。“我们要对它进行离心5分钟,这样蛋白红细胞就会跟DNA 彻底分离开。”经过10分钟的离心后,工作人员取出了样本,记者看到离心管里的液体被分成了两个层面,下边的一层看上去有些暗红。“这个暗红色的就是需要分离出去的部分。”工作人员解释说。
“DNA就在这部分清澈透明的液体中,下一步就是把它提取出来。”工作人员将冷藏的乙醇倒入透明液体后,然后将管子进行颠倒晃动,不久里边就出现了白色棉絮状的东西。“这白色棉絮状东西就是DNA。”工作人员称,这还没有结束,还需要继续进行离心,将这些白色棉絮状的物体析出。过了5分钟,工作人员将其从离心机取出。这时,记者看到在离心管的底端有一个绿豆粒大小的白点。“这个白点就是我们要的东西。”
变换温度让DNA繁殖
“析出来的这部分DNA太少了,如果做实验肯定是不够用的,所以我们还得进行扩增。
工作人员将测量好浓度的DNA 可扩增剂加在一起,放进专用的仪器上。“这个步骤需要三个钟头。”工作人员称,在这个过程中温度是需要不断改变的,需要好几种温度交换进行。据介绍,DNA是两条链,扩增就得把链打开,然后每条链和所需要的材料结合。“链打开时需要一种温度,结合时需要另一种温度,所以在这个过程中温度是需要不断变化的。
让DNA“跑位”采集数据
“DNA 扩增后,就开始进行位点比对了。这个过程需要将DNA放入到一个完全封闭的仪器中,把它固定在一个位置,然后用电脑来操作机器。“这个过程中,DNA 会按照电脑发出的指令,从这头跑到那头。这样DNA上的所有信号都会被机器收集下来。
据介绍,在一般情况下,设备会自动提取15个位点,后再根据位点的型别套入公式进行计算,判断是否是亲子关系。
“试剂不同,位点相同的数量也不一样,拿我们用的试剂来说,如果有三个以上位点不同,就直接排除亲子关系了。如果不同的位点在三个以内,不能排除突变造成的不同,这种情况下还需要加做位点再次对比。整个亲子鉴定过程需要5到10个工作日。